一、pKa和pH的基本概念

pKa：分析物（通常是酸或堿）分子解離出一半離子的酸堿常數(shù)。pKa越小，酸性越強(qiáng)。

pH：流動(dòng)相的氫離子濃度，是溶液酸堿性的量度。

二、pH決定分析物電離/分子型比例

當(dāng)pH = pKa

分子“電離型”（帶電）和“分子型”（不帶電）的比例約為1:1（即50%電離）。

當(dāng)pH < pKa (對(duì)酸性分析物)

分析物主要為非解離“分子型”。

當(dāng)pH > pKa (對(duì)酸性分析物)

分析物主要為電離“陰離子型”。

對(duì)堿性化合物正好相反：

pH < pKa：質(zhì)子化（陽(yáng)離子型）

pH > pKa：非離子（分子型）

三、在反相色譜中的實(shí)際意義

1. 分析物的保留與分離

非離子型分析物在反相色譜柱（C18等）上疏水作用大，保留時(shí)間長(zhǎng)。

帶電型分析物極性增強(qiáng)，難吸附色譜柱，保留時(shí)間短。

2. 流動(dòng)相pH值選擇思路

一般將pH設(shè)置在距離分析物pKa值至少1–2個(gè)pH單位以外，使其處于單一（分子型或離子型）形態(tài)，確保保留行為穩(wěn)定、峰型好。

如酸性化合物pKa=5，分析時(shí)通常在pH<3或pH>7。

堿性化合物pKa=9，則用pH<7或pH>11（實(shí)際pH受色譜柱耐受限，通常2～8之間）。